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本制品包含KOD DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。本制品使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量2×KOD PCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。KOD酶所具有的超强3’→ 5’外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，达到100～138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR产物(复杂基因组DNA扩增建议不超过2kb），扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。

• 建议PCR条件
  以50μL反应体系为例，如反应体系不同，可按此比例增加或减少用量。
  

  成分	用量	终浓度
  Template	Variable	＜0.5μg
  Forward Primer 10μM	1μL	0.2μM
  Reverse Primer 10μM	1μL	0.2μM
  2×KOD PCR MasterMix	25μL	1×
  dH2O	至50μL

  
  用无菌PCR级别的水补至终体积50μL。实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加2×KOD PCR MasterMix（使用前请保证充分溶解并混匀）。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。
  注意：在冰浴上混合PCR各种成分，防止KOD DNA聚合酶降解引物和模板。
  
• PCR条件的优化
  
  • 质粒或者噬菌体模板：
    模板量5～20ng，循环参数如下表
    

    Cycling parameters	<1kbp target DNA	1-2kbp target DNA	3-4kbp target DNA	5-6kbp target DNA
    Step 1	94℃ 2min	94℃ 2min	94℃ 2min	94℃ 2min
    Step 2	94℃ 20sec	94℃ 20sec	94℃ 20sec	94℃ 30sec
    Step 3	Ta 20sec	Ta 20sec	Ta 20sec	Ta 30sec
    Step 4	72℃ 20sec	72℃ 30sec	72℃ 40sec	72℃ 60sec
    Step 5	72℃ 5min	72℃ 5min	72℃ 5min	72℃ 5min
    Repeat step 2-4 for 30-35cycles
    Ta= Tm-5℃

    
    
  • 基因组DNA和cDNA模板：
    基因组DNA模板量为50～100ng，1～2μL cDNA（起始转录用的RNA为500ng），循环参数如下表
    

    Cycling parameters	<2kbp target DNA
    Step 1	94℃ 2min
    Step 2	94℃ 20～30sec
    Step 3	Ta 15～20sec
    Step 4	72℃ 20～60sec
    Step 5	72℃ 5min
    Repeat step 2-4 for 30-35cycles
    Ta= Tm - 5℃